SNAI 1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400244-ACT

SNAI1 kodiert SNAI1 (Snail), einen Zinkfinger-Transkriptionsrepressor, der die epithelial-mesenchymale Transition (EMT) orchestriert, indem er epitheliale Genprogramme – darunter CDH1 – direkt unterdrückt und mesenchymale Phänotypen fördert. Über Interaktionen mit TGF-β-, Wnt/β-Catenin-, Notch- und entzündlichen Signalnetzwerken reguliert SNAI1 während Entwicklung und Gewebeumbau Zelladhäsion, Polarität, Motilität und Linienplastizität. Eine dysregulierte SNAI1-Aktivität ist häufig mit Tumorprogressionsmerkmalen wie Invasion, metastatischer Dissemination, stammzellähnlichen Zuständen und Therapieresistenz verknüpft und trägt zudem zu fibroseassoziierten Transkriptionsprogrammen bei. Diese Eigenschaften machen SNAI1 zu einem zentralen Knotenpunkt für die Untersuchung der transkriptionellen Kontrolle der EMT, des Chromatin-Remodelings und mikroenvironmentgetriebener Zellzustandsübergänge.

SNAI 1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SNAI1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SNAI 1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SNAI1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SNAI1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SNAI 1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SNAI1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SNAI 1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SNAI 1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SNAI1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.