Smurf2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401431-ACT

SMURF2は、HECTドメインをもつE3ユビキチンリガーゼであるSmurf2をコードしており、シグナル伝達因子や細胞周期関連因子のユビキチン化を触媒することでタンパク質の分解・ターンオーバーを制御します。Smurf2は、経路メディエーターをユビキチン依存的に制御することによりTGF-β/BMPシグナル伝達を調節する因子として特によく知られており、その結果として上皮間葉転換（EMT）、分化、組織恒常性に影響を及ぼします。さらに、DNA損傷応答や細胞老化関連プログラムとも交差し、ユビキチンシグナルをゲノム安定性やストレス適応と結び付けています。SMURF2活性の破綻や経路バランスの変化は、状況依存的に腫瘍進行、線維化関連シグナル、炎症性表現型の変動と関連づけられており、シグナル伝達のクロストーク機構を解析するうえで有用な結節点となります。

Smurf2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SMURF2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Smurf2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SMURF2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSMURF2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Smurf2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSMURF2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSmurf2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSMURF2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSmurf2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。