Plasmide Double Nickase (h) SMCR7L: sc-407077-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) SMCR7L correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide SMCR7L Double Nickase (h) et le plasmide SMCR7L Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant MIEF1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: SMCR7L Antibody (A-6): sc-514135
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) SMCR7L | sc-407077-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) SMCR7L | sc-407077-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MIEF1 code pour SMCR7L (également appelé MID51), une protéine de la membrane externe mitochondriale qui agit comme récepteur de la GTPase apparentée à la dynamine DRP1 et contribue à coordonner la fission mitochondriale avec la distribution des organites. En modulant l’équilibre fission–fusion, SMCR7L influence l’efficacité de la phosphorylation oxydative, le contrôle qualité mitochondrial et la sensibilité aux voies de réponse au stress telles que la mitophagie et l’apoptose. La dérégulation de la dynamique mitochondriale est largement impliquée dans la neurodégénérescence, les troubles cardiométaboliques et le remodelage métabolique associé au cancer, ce qui fait de MIEF1 une cible pertinente pour des études mécanistiques de l’homéostasie mitochondriale.
SMCR7L Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MIEF1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MIEF1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MIEF1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MIEF1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.