SMC4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405067-ACT

SMC4 codifica uma ATPase central do complexo de manutenção estrutural dos cromossomos que, juntamente com a SMC2, forma o arcabouço catalítico dos complexos de condensina necessários para a condensação dos cromossomos na mitose, a resolução das cromátides-irmãs e a segregação cromossômica fiel. Por meio da extrusão de alças de DNA dependente de ATP e da organização da cromatina em níveis superiores, a SMC4 sustenta a dinâmica da cromatina associada à replicação, a coordenação da resposta a danos no DNA e a manutenção da estabilidade do genoma. A desregulação da expressão ou da função de SMC4 tem sido associada à instabilidade cromossômica e a fenótipos de proliferação aberrante observados em múltiplos contextos tumorais, tornando-a um alvo útil para estudar aneuploidia e o controle de checkpoints do ciclo celular. Além disso, a arquitetura da cromatina dependente de SMC4 influencia programas transcricionais ligados à mitose e a respostas ao estresse, fornecendo uma ponte mecanística entre a estrutura cromossômica e a regulação gênica.

SMC4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SMC4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SMC4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SMC4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SMC4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SMC4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SMC4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SMC4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SMC4 em células tumorais com expressão de SMC4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.