Partículas Lentivirales de Activación (h) Slit2: sc-401586-LAC

SLIT2 codifica Slit2, una señal de guía secretada asociada a la matriz extracelular que se une a receptores ROBO para regular el guiado axonal, la migración neuronal y la motilidad celular direccional. Más allá del neurodesarrollo, la señalización Slit2–ROBO influye en la dinámica del citoesqueleto a través de las GTPasas de la familia Rho y se interrelaciona con vías que controlan la adhesión y la quimiotaxis, incluida la modulación de la migración impulsada por CXCL12/CXCR4 en algunos contextos. Se han descrito alteraciones en la expresión de SLIT2 y su silenciamiento epigenético en múltiples tipos de tumores, y con frecuencia se estudian por sus posibles funciones en la invasión, la angiogénesis y el comportamiento metastásico. SLIT2 también se investiga en biología vascular y en procesos inflamatorios, donde las señales de guía moldean el tráfico de células endoteliales e inmunitarias.

Las partículas de activación lentiviral Slit2 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de SLIT2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Slit2 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción SLIT2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Slit2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo SLIT2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.