Particules Lentivirales d'Activation (h) Slit2: sc-401586-LAC

SLIT2 code pour Slit2, un signal de guidage sécrété associé à la matrice extracellulaire, qui se lie aux récepteurs ROBO pour réguler le guidage des axones, la migration neuronale et la motilité cellulaire directionnelle. Au-delà du neurodéveloppement, la signalisation Slit2–ROBO influence la dynamique du cytosquelette via les GTPases de la famille Rho et s’articule avec des voies contrôlant l’adhésion et la chimiotaxie, notamment par la modulation, dans certains contextes, de la migration induite par CXCL12/CXCR4. Une expression altérée de SLIT2 ainsi qu’un silencement épigénétique ont été rapportés dans de nombreux types de tumeurs et sont fréquemment étudiés pour leurs rôles dans l’invasion, l’angiogenèse et le comportement métastatique. SLIT2 est également étudié en biologie vasculaire et dans les processus inflammatoires, où les signaux de guidage façonnent le trafic des cellules endothéliales et immunitaires.

Les particules d'activation lentivirales Slit2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de SLIT2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Slit2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription SLIT2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Slit2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif SLIT2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.