SLC6A14 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-408198

Descripción general

SLC6A14 (también conocido como ATB0,+) codifica un transportador de membrana plasmática dependiente de sodio y cloruro que media la captación concentrativa de aminoácidos neutros y catiónicos, con una notable capacidad para aceptar un amplio espectro de sustratos, incluidos aminoácidos esenciales. Al regular la disponibilidad intracelular de aminoácidos, SLC6A14 influye en vías de detección de nutrientes y de señalización metabólica como mTORC1, moldeando el crecimiento celular, el equilibrio redox y la adaptación al estrés. Su expresión se ha vinculado a la fisiología del transporte epitelial y a un flujo de aminoácidos alterado en contextos patológicos en los que la adquisición de nutrientes y el metabolismo se reprograman. Como transportador de solutos en la superficie celular, SLC6A14 constituye un punto accesible para diseccionar la contribución del transporte de aminoácidos a la proliferación, la diferenciación y las interacciones inmunometabólicas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SLC6A14 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SLC6A14 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SLC6A14 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SLC6A14 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SLC6A14.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SLC6A14 para la investigación de la señalización de SLC6A14, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SLC6A14 críticos para la función de SLC6A14
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SLC6A14 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SLC6A14 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido SLC6A14 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SLC6A14. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SLC6A14 (h) y el plásmido HDR SLC6A14 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SLC6A14 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SLC6A14 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.