SLC43A1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-417236-ACT

SLC43A1は、ナトリウム非依存性の大型中性アミノ酸トランスポーター（LAT3）をコードしており、分岐鎖アミノ酸をはじめとする必須アミノ酸の細胞内取り込みを促進することで、栄養感知および同化代謝を支えます。細胞内アミノ酸の利用可能性を調節することにより、SLC43A1はmTORC1関連シグナル伝達、タンパク質合成、ならびに増殖状態・分化状態における代謝適応に影響します。SLC43A1の発現変化は、代謝リプログラミングや腫瘍に関連した栄養獲得の文脈で報告されており、トランスポーター活性が成長やストレス応答の在り方を左右し得ます。これらの特性により、SLC43A1はアミノ酸輸送ダイナミクス、代謝経路間クロストーク、そして栄養トランスポーター・ネットワークの転写制御を研究するうえで有用な結節点となります。

SLC43A1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC43A1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SLC43A1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC43A1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC43A1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SLC43A1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC43A1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSLC43A1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC43A1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSLC43A1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。