Plasmide CRISPR/Cas9 KO SLC35A2 (m): sc-423599

Présentation

Slc35a2 code SLC35A2, un transporteur d’UDP-galactose résident du Golgi qui importe des substrats de sucres nucléotidiques dans la voie sécrétoire afin de soutenir la galactosylation des glycoprotéines et des glycolipides. En régulant la maturation des glycannes, SLC35A2 influence le repliement des protéines, le trafic vésiculaire, l’adhésion cellule–cellule et la signalisation des récepteurs, avec des effets en aval sur les voies dépendant d’une glycosylation de surface correcte. Une perturbation du transport de l’UDP-galactose peut modifier l’homéostasie du RE/Golgi et la fonction des protéines membranaires, affectant des processus tels que le développement neuronal et les interactions des cellules immunitaires. Une glycosylation dérégulée liée à SLC35A2 a été associée aux troubles congénitaux de la glycosylation et à des phénotypes plus larges impliquant le neurodéveloppement et la fonction des tissus épithéliaux, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SLC35A2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Slc35a2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Slc35a2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Slc35a2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SLC35A2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Slc35a2 pour l'étude de la signalisation de SLC35A2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Slc35a2 essentiels à la fonction de SLC35A2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Slc35a2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SLC35A2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SLC35A2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Slc35a2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SLC35A2 plasmide HDR (m) et le SLC35A2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Slc35a2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Slc35a2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.