SLC25A11 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404380-ACT

SLC25A11 (mitochondrialer 2‑Oxoglutarat/Malat‑Carrier, OGC) ist ein Soluttransporter der inneren Mitochondrienmembran, der Malat gegen 2‑Oxoglutarat austauscht und damit den Tricarbonsäurezyklus (TCA‑Zyklus) mit dem zytosolischen Stoffwechsel koppelt. Durch die Unterstützung des Malat‑Aspartat‑Shuttles und der mitochondrialen Redoxbalance trägt SLC25A11 zur Regulation der NADH/NAD⁺‑Homöostase, der Anaplerose und des oxidativen Stoffwechsels bei. Seine Aktivität steht in Wechselwirkung mit glutamingetriebenen Kohlenstoffflüssen, der Handhabung reaktiver Sauerstoffspezies und der metabolischen Umprogrammierung, wie sie in proliferativen und stressangepassten zellulären Zuständen beobachtet wird. Eine veränderte Expression oder Funktion von SLC25A11 wurde in verschiedenen experimentellen Systemen mit metabolischen Dysregulationen in Verbindung gebracht, die für die Tumorbiologie, mitochondriale Funktionsstörungen und eine erhöhte Anfälligkeit gegenüber oxidativem Stress relevant sind.

SLC25A11 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SLC25A11-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SLC25A11 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SLC25A11-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SLC25A11-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SLC25A11-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SLC25A11-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SLC25A11-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SLC25A11-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SLC25A11-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.