Plasmide CRISPR/Cas9 KO SLC17A9 (m): sc-432833

Présentation

Slc17a9 code pour SLC17A9, un transporteur vésiculaire de nucléotides (VNUT) qui charge l’ATP et d’autres nucléotides dans les vésicules de sécrétion, permettant une signalisation purinergique régulée. En contrôlant la teneur en ATP des vésicules, SLC17A9 influence une communication dépendante de l’exocytose qui mobilise les voies des récepteurs P2X/P2Y et des réponses en aval liées au Ca²⁺ et aux MAPK, dans des contextes neuronaux et immunitaires. Cette activité de transport soutient des processus tels que la neurotransmission, l’activation microgliale et la libération de médiateurs inflammatoires, faisant de Slc17a9 un nœud utile pour étudier le dialogue neuro-immunitaire et l’inflammation stérile. Une dérégulation de la gestion vésiculaire de l’ATP et du tonus purinergique a été impliquée dans la signalisation de la douleur, la neuroinflammation et les réponses aux lésions tissulaires, ce qui positionne Slc17a9 comme une cible mécaniquement pertinente pour l’exploration des voies dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SLC17A9 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Slc17a9 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Slc17a9, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Slc17a9 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SLC17A9.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Slc17a9 pour l'étude de la signalisation de SLC17A9, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Slc17a9 essentiels à la fonction de SLC17A9
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Slc17a9 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SLC17A9 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SLC17A9 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Slc17a9. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SLC17A9 plasmide HDR (m) et le SLC17A9 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Slc17a9 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Slc17a9 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.