Skp2 p45 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400534-ACT

SKP2 codifica a proteína F-box Skp2 p45, um componente de reconhecimento de substratos do complexo ligase de ubiquitina E3 do tipo SCF (SKP1–CUL1–F-box), que controla a degradação proteassomal de reguladores-chave do ciclo celular. Ao promover a ubiquitinação de alvos como CDKN1B/p27^Kip1 e outras proteínas inibidoras do crescimento, a Skp2 favorece a transição G1/S, a competência para replicação do DNA e respostas coordenadas de checkpoints. A atividade de SKP2 interage com programas de sinalização ligados a PI3K–AKT, RB–E2F e TGF-β, que moldam proliferação, senescência e adaptação ao estresse. A expressão ou função desregulada de SKP2 tem sido associada a alterações no controle do ciclo celular e instabilidade genômica em múltiplos contextos relevantes para doenças, tornando-a um nó comum para estudos mecanísticos de sinalização oncogênica e homeostase proteica.

Skp2 p45 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SKP2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Skp2 p45 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SKP2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SKP2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Skp2 p45. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SKP2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Skp2 p45 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Skp2 p45 em células tumorais com expressão de SKP2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.