Six5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-410513

Übersicht

SIX5 kodiert den menschlichen Homeobox-Transkriptionsfaktor Six5, einen DNA-bindenden Regulator, der dabei hilft, Genexpressionsprogramme während der Entwicklung und der Gewebedifferenzierung zu koordinieren. Six5 wird mit der Kontrolle von Transkriptionsnetzwerken in Verbindung gebracht, die Zellschicksalsentscheidungen steuern, und kann mit Signalwegen interagieren, die an der Progression des Zellzyklus und der stressabhängigen Genregulation beteiligt sind. Eine veränderte SIX5-Gendosis oder fehlregulierte Expression wurde mit krankheitsrelevanten Phänotypen in Zusammenhang gebracht, darunter Merkmale, die bei der myotonen Dystrophie Typ 1 auftreten können, unter anderem durch Effekte auf benachbarte Loci und gemeinsame regulatorische Landschaften. Da Six5 die linienspezifische Transkription und die zelluläre Homöostase beeinflusst, wird es häufig in Modellen der Entwicklungsbiologie, der neuromuskulären Funktion und der Transkriptionsdysregulation untersucht.

Das Six5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SIX5-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SIX5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SIX5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Six5-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SIX5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Six5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SIX5-Exone abzielen, die für die Six5-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SIX5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Six5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Six5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SIX5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Six5 HDR-Plasmid (h) und Six5 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SIX5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SIX5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.