Plásmido Doble Nickase (h) Sil: sc-409193-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Sil consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Sil (h) y el plásmido de doble nickasa Sil (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a STIL. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Sil Anticuerpo (A-6): sc-271910
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Sil | sc-409193-NIC | 20 µg | $410.00 |
STIL (locus interruptor SCL/TAL1), también conocido como Sil, codifica una proteína centrosómica necesaria para la biogénesis de los centríolos y el ensamblaje adecuado del huso mitótico. Funciona en el eje PLK4–STIL–SAS-6 para iniciar la formación del procentríolo, lo que favorece una segregación cromosómica precisa y la progresión del ciclo celular. Debido a sus funciones en la duplicación del centrosoma y en procesos del neurodesarrollo, la alteración de la actividad de STIL se asocia con la amplificación de centrosomas, la desregulación proliferativa y trastornos del desarrollo como la microcefalia primaria. Estas características convierten a STIL en un objetivo ampliamente utilizado para estudiar la homeostasis del centrosoma, la fidelidad mitótica y las relaciones entre genotipo y fenotipo en células humanas proliferantes.
Sil El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus STIL en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de STIL. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de STIL. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con STIL alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.