SIAE Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423745

Descripción general

El SIAE de ratón (esterasa acetiladora del ácido siálico) codifica una esterasa lisosomal/secretada que elimina grupos O-acetilo de los ácidos siálicos, remodelando las estructuras de glicanos en glicoproteínas y glicolípidos. Al regular el estado de acetilación de ligandos sialilados, SIAE influye en eventos de reconocimiento mediados por lectinas y en la señalización posterior en la superficie celular, con gran relevancia para la homeostasis de las células inmunitarias. Las modificaciones alteradas del ácido siálico se asocian con cambios en los umbrales de señalización del receptor de células B, en los puntos de control de tolerancia y en las respuestas inflamatorias, lo que convierte a Siae en una diana útil en estudios de autoinmunidad y desregulación inmunitaria. La edición de glicanos dependiente de SIAE también se cruza con vías que gobiernan el procesamiento endosomal/lisosomal y el tráfico de receptores, lo que respalda investigaciones en glicobiología e inmunometabolismo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SIAE (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Siae en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Siae junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Siae tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SIAE.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Siae para la investigación de la señalización de SIAE, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Siae críticos para la función de SIAE
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Siae para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SIAE CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido SIAE CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Siae. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SIAE (m) y el plásmido HDR SIAE (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Siae para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Siae definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.