Sg III Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422812

Descripción general

La secretogranina III (Scg3; Sg III) es una proteína de la familia de las graninas enriquecida en la vía secretora regulada, donde contribuye a la biogénesis de gránulos secretores, la clasificación de la carga y el empaquetamiento de hormonas peptídicas/neuropéptidos en células endocrinas y neuroendocrinas. En el ratón, la Sg III participa en la formación de vesículas de núcleo denso y en la exocitosis regulada, influyendo en el tráfico vesicular y en programas de secreción acoplados a estímulos. La alteración del funcionamiento de la red de graninas se ha vinculado con una señalización neuroendocrina desregulada y con desequilibrios de la homeostasis metabólica, lo que convierte a Scg3 en un objetivo útil para estudiar la organización de la vía secretora y la dinámica de liberación dependiente de estímulos. El análisis experimental de Scg3 respalda estudios mecanísticos sobre la maduración de vesículas, el procesamiento proteolítico de prohormonas y la remodelación secretora en respuesta al estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Sg III (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Scg3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Scg3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Scg3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Sg III.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Scg3 para la investigación de la señalización de Sg III, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Scg3 críticos para la función de Sg III
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Scg3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Sg III CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Sg III CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Scg3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Sg III (m) y el plásmido HDR Sg III (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Scg3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Scg3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.