Plásmido Doble Nickase (h) SF2/ASF: sc-400737-NIC

El gen humano **SRSF1** codifica el factor de empalme **SF2/ASF**, una proteína de unión a ARN rica en dominios SR que acopla el empalme del pre-ARNm con la exportación, la estabilidad y la traducción del ARNm. Al reconocer potenciadores exónicos del empalme y coordinar el ensamblaje del espliceosoma, SF2/ASF configura programas de empalme alternativo que influyen en la progresión del ciclo celular, la apoptosis y la expresión génica sensible al estrés. La actividad de SRSF1 se integra con la señalización dependiente de fosforilación y con redes de procesamiento de ARN, incluida la regulación de isoformas de transcritos que modulan salidas asociadas a MAPK/PI3K. La desregulación de la expresión de SRSF1 o del control del empalme se ha vinculado con un uso aberrante de isoformas y fenotipos oncogénicos en múltiples contextos tumorales, lo que lo convierte en un nodo clave para estudiar mecanismos de enfermedad impulsados por el procesamiento de ARN.

SF2/ASF El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SRSF1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SRSF1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SRSF1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SRSF1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.