Set1B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406129

Übersicht

SETD1B kodiert die Lysin-Methyltransferase Set1B, eine katalytische Komponente COMPASS-ähnlicher, chromatinmodifizierender Komplexe, die H3K4-Methylierungsmarken setzen, welche mit transkriptionsaktivem Chromatin assoziiert sind. Über die Regulation von Promotor- und Enhancer-Zuständen trägt Set1B zu RNA-Polymerase-II-abhängigen Genexpressionsprogrammen bei, die Zellidentität, Proliferation und Differenzierung beeinflussen. Die Aktivität von SETD1B greift in breitere epigenetische Signalwege ein, die Chromatinzugänglichkeit und DNA-Schadensantworten steuern, indem sie die Landschaft der Histonmodifikationen mitprägt. Genetische Varianten und Fehlregulation von SETD1B wurden mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und veränderter transkriptioneller Kontrolle in Verbindung gebracht, was es zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien der Genregulation in menschlichen Zellen macht.

Das Set1B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SETD1B-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SETD1B-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SETD1B nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Set1B-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SETD1B-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Set1B-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SETD1B-Exone abzielen, die für die Set1B-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SETD1B-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Set1B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Set1B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SETD1B-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Set1B HDR-Plasmid (h) und Set1B HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SETD1B-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SETD1B-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.