SESN2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402442-ACT

SESN2 umano (Sestrin-2) è una proteina inducibile dallo stress che coordina l’adattamento cellulare a insulti metabolici, ossidativi e genotossici. Modula la segnalazione AMPK–mTORC1, sostiene l’omeostasi redox tramite risposte antiossidanti e contribuisce all’autofagia e ai programmi di sensing dei nutrienti che determinano sopravvivenza e crescita cellulare. SESN2 è spesso studiata nel contesto dell’infiammazione e dello stress mitocondriale, dove influenza l’accumulo di ROS e le reti trascrizionali a valle. Una segnalazione di SESN2 deregolata è stata associata a disfunzioni cardiometaboliche, neurodegenerazione e fenotipi di stress legati al cancro, rendendola un nodo utile per studi a livello di pathway.

SESN2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SESN2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SESN2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SESN2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SESN2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SESN2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SESN2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SESN2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SESN2 nelle cellule tumorali con espressione di SESN2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.