SENP1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-417768-ACT

Humanes SENP1 (sentrin-spezifische Protease 1) ist eine SUMO-Protease, die SUMO-Modifikationen von Zielproteinen entfernt und damit die SUMOylierungsabhängige Kontrolle von Proteinstabilität, subzellulärer Lokalisation und Transkriptionsaktivität reguliert. Durch dynamische DeSUMOylierung beeinflusst SENP1 die nukleo-zytoplasmatische Signalübertragung, den Zellzyklus, DNA-Schadensantworten sowie stressadaptive Transkriptionsprogramme, einschließlich Signalwege, die mit Hypoxie und metabolischer Regulation verknüpft sind. Eine veränderte SENP1-Aktivität wird mit fehlregulierter Signalübertragung von Transkriptionsfaktoren, aberranter Proliferation und Veränderungen der Proteostase in Verbindung gebracht, die in der Krebsbiologie und anderen Erkrankungen mit gestörter Homöostase des SUMO-Signalwegs häufig untersucht werden.

SENP1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SENP1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SENP1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SENP1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SENP1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SENP1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SENP1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SENP1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SENP1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SENP1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.