Selenoprotein W CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405939

Übersicht

SELENOW kodiert Selenoprotein W, ein kleines selenhaltiges Protein, das besonders in Muskel und Gehirn angereichert ist und durch selenolabhängige antioxidative Aktivität zur zellulären Redoxhomöostase beiträgt. Es wird mit der Regulation des Gleichgewichts reaktiver Sauerstoffspezies, der Aufrechterhaltung des Thiolstatus von Proteinen sowie der Stabilität des Zytoskeletts und der Stressanpassung unter oxidativen und entzündlichen Bedingungen in Verbindung gebracht. SELENOW-assoziierte Prozesse überschneiden sich mit glutathionabhängigen Redoxnetzwerken und der übergeordneten Selenbiologie, die die Mitochondrienfunktion und zelluläre Überlebensprogramme beeinflusst. Eine veränderte SELENOW-Expression wurde in Zusammenhängen von oxidativem Stress, neurodegenerationsassoziierten Signalwegen sowie metabolischen und entzündlichen Zuständen beschrieben, was SELENOW für mechanistische Studien zur Redoxsignalgebung und Stressempfindlichkeit relevant macht.

Das Selenoprotein W CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SELENOW-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SELENOW-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SELENOW nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Selenoprotein W-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SELENOW-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Selenoprotein W-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SELENOW-Exone abzielen, die für die Selenoprotein W-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SELENOW-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Selenoprotein W CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Selenoprotein W CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SELENOW-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Selenoprotein W HDR-Plasmid (h) und Selenoprotein W HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SELENOW-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SELENOW-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.