Selenoprotein W Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405939

Panoramica

SELENOW codifica la selenoproteina W, una piccola proteina contenente selenio, particolarmente abbondante nel muscolo e nel cervello, che contribuisce all’omeostasi redox cellulare grazie a un’attività antiossidante dipendente dal gruppo selenolico. È implicata nella regolazione dell’equilibrio delle specie reattive dell’ossigeno, nel mantenimento dello stato dei tioli proteici e nel supporto dell’integrità del citoscheletro e dell’adattamento allo stress in condizioni ossidative e infiammatorie. I processi associati a SELENOW si intersecano con le reti redox dipendenti dal glutatione e con aspetti più ampi della biologia del selenio che influenzano la funzione mitocondriale e i programmi cellulari di sopravvivenza. Un’alterata espressione di SELENOW è stata riportata in contesti di stress ossidativo, in vie associate alla neurodegenerazione e in stati metabolici e infiammatori, rendendola rilevante per studi meccanicistici sulla segnalazione redox e sulla suscettibilità allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Selenoprotein W (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SELENOW in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SELENOW insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SELENOW a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Selenoprotein W.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SELENOW per lo studio della segnalazione di Selenoprotein W, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SELENOW critici per la funzione di Selenoprotein W
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SELENOW per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Selenoprotein W CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Selenoprotein W CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SELENOW. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Selenoprotein W Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Selenoprotein W (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SELENOW per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SELENOW definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.