Selenoprotein S CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404444-ACT

SELENOS kodiert das Selenoprotein S, ein Selenoprotein der Membran des endoplasmatischen Retikulums, das die ER-assoziierte Degradation (ERAD) und die Proteostase unterstützt, indem es die Beseitigung fehlgefalteter Proteine fördert. Durch die Modulation von ER-Stress-Signalwegen und der Redox-Homöostase beeinflusst Selenoprotein S Signalwege der unfolded protein response (UPR) sowie die Ausgänge inflammatorischer Signalgebung. Unterschiede in der SELENOS-Expression wurden mit veränderter Zytokinproduktion und einer veränderten Anfälligkeit für metabolische und immunbezogene Phänotypen in Verbindung gebracht, was seine Rolle an der Schnittstelle von oxidativem Stress und Entzündung widerspiegelt. Als menschliches Gen der ER-Qualitätskontrolle wird SELENOS häufig im Kontext der Anpassung an chronischen Stress, der Aktivierung von Makrophagen und zellulären Antworten auf proteotoxische Belastungen untersucht.

Selenoprotein S Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SELENOS-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Selenoprotein S Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SELENOS-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SELENOS-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Selenoprotein S-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SELENOS-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Selenoprotein S-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Selenoprotein S-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SELENOS-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.