Selenoprotein I Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-408993-ACT

O SELENOI humano codifica a selenoproteína I, uma enzima localizada no retículo endoplasmático (RE) que atua como fosfotransferase de etanolamina, catalisando uma etapa-chave na biossíntese de novo de fosfatidiletanolamina. Ao controlar a composição de fosfolipídios de membrana, o SELENOI influencia a homeostase do RE, o tráfego vesicular e processos de sinalização dependentes de lipídios que moldam as respostas celulares ao estresse e a função das organelas. Alterações no metabolismo de fosfolipídios de etanolamina têm sido associadas a mudanças na dinâmica de membranas e na comunicação mitocôndria–RE, processos relevantes para a neurobiologia e a regulação metabólica. Como selenoproteína, o SELENOI também se conecta a vias sensíveis ao estado redox por meio da biologia do selênio e do controle de qualidade de proteínas associado ao RE.

Selenoprotein I O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SELENOI sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Selenoprotein I O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SELENOI em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SELENOI, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Selenoprotein I. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SELENOI nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Selenoprotein I no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Selenoprotein I em células tumorais com expressão de SELENOI silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.