Seipin Double Nickase Plasmid (h): sc-406865-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Seipin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Seipin Double-Nickase-Plasmid (h) und Seipin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf BSCL2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Seipin Double Nickase Plasmid (h) | sc-406865-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Seipin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-406865-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen **BSCL2** kodiert **Seipin**, ein Membranprotein des endoplasmatischen Retikulums, das die Biogenese von Lipidtröpfchen organisiert und durch die Koordination von Kontaktstellen zwischen ER und Lipidtröpfchen eine korrekte Speicherung von Triacylglycerolen fördert. Seipin beeinflusst die Differenzierung von Adipozyten sowie Signalwege der Lipidhomöostase und verknüpft damit die Synthese neutraler Lipide, den Umbau von Phospholipiden und die Membrandynamik von Organellen. Eine Störung von **BSCL2** beeinträchtigt die Morphologie von Lipidtröpfchen und das zelluläre Energiegleichgewicht; ihre Relevanz ist u. a. für die kongenitale generalisierte Lipodystrophie sowie für seipinassoziierte neurodegenerative Phänotypen belegt, einschließlich distaler hereditärer motorischer Neuropathie und verwandter Erkrankungen. Diese Zusammenhänge machen **BSCL2** zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung von Lipidstoffwechsel, Proteostase‑Stressantworten und zelltypspezifischer Vulnerabilität.
Seipin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des BSCL2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von BSCL2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die BSCL2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit BSCL2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.