Seipin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406865

Übersicht

BSCL2 kodiert Seipin, ein Membranprotein des endoplasmatischen Retikulums (ER), das die Biogenese von Lipidtröpfchen organisiert und die Triacylglycerolspeicherung reguliert, indem es ER–Lipidtröpfchen-Kontakte koordiniert. Seipin unterstützt die Differenzierung von Adipozyten und die Lipidhomöostase durch Effekte auf das Phospholipid-Remodeling, die Verpackung neutraler Lipide und die ER-Proteostase und verknüpft so den Lipidstoffwechsel mit der Organellenmorphologie. Eine Störung von BSCL2 beeinträchtigt Größe und Verteilung der Lipidtröpfchen und kann ER-Stressantworten auslösen, was es zu einem zentralen Knotenpunkt in Studien zur zellulären Energiebilanz macht. Genetische Varianten in BSCL2 sind mit der kongenitalen generalisierten Lipodystrophie und neurodegenerativen Phänotypen aus dem Seipinopathie-Spektrum assoziiert und verbinden so Fettgewebsdysfunktion und neuronale Vulnerabilität mit einer veränderten Lipidverarbeitung.

Das Seipin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des BSCL2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des BSCL2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von BSCL2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Seipin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von BSCL2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Seipin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf BSCL2-Exone abzielen, die für die Seipin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere BSCL2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Seipin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Seipin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des BSCL2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Seipin HDR-Plasmid (h) und Seipin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von BSCL2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten BSCL2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.