secretin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405534-ACT

ヒトSCTはセクレチンをコードする。セクレチンは、古典的には十二指腸のS細胞で産生されるペプチドホルモンであり、膵臓および胆道における重炭酸分泌を促進し、胃酸分泌を調節することで消化管生理を統合的に制御する。セクレチンのシグナルは主としてセクレチン受容体（SCTR）を介して伝達される。SCTRはアデニル酸シクラーゼを活性化し、標的上皮においてcAMP/PKA依存的な転写プログラムを誘導するGタンパク質共役受容体である。消化機能にとどまらず、セクレチン応答性経路は体液・電解質バランスにも影響し、特定の組織では神経内分泌シグナルを形成し得る。セクレチン—SCTR軸の活性異常は、膵臓・胆道疾患や、より広い内分泌・代謝表現型との関連で検討されており、ホルモン制御性の上皮輸送・分泌の機序研究を支持する。

secretin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SCTの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

secretin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SCT 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSCT転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性secretinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSCT遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるsecretin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSCT発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるsecretin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。