Plasmide CRISPR d'Activation (h) SEC22B: sc-402384-ACT

SEC22B (Sec22 homolog B) code une protéine v-SNARE localisée à l’interface RE–Golgi et favorise l’arrimage des vésicules ainsi que la fusion membranaire au sein de la voie sécrétoire précoce. En s’associant à des complexes t-SNARE, SEC22B contribue au trafic antérograde et rétrograde, assurant la maturation des protéines, l’homéostasie des organites et le flux de cargaison sécrétoire. SEC22B a également été impliquée dans la présentation croisée des antigènes et le trafic du phagosome vers le cytosol dans les cellules immunitaires, reliant le transport vésiculaire à la signalisation de l’immunité adaptative. La dérégulation des programmes de trafic membranaire impliquant SEC22B peut influencer les réponses au stress du RE et les réseaux de protéostasie, fréquemment perturbés dans le cancer, les maladies neurodégénératives et les phénotypes inflammatoires.

SEC22B Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SEC22B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SEC22B Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SEC22B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SEC22B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SEC22B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SEC22B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SEC22B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SEC22B dans les cellules tumorales présentant une expression de SEC22B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.