Scratch1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-410173

Übersicht

SCRT1 kodiert Scratch1, einen Zinkfinger-Transkriptionsfaktor, der in neuronalen Zelllinien überwiegend als transkriptioneller Repressor wirkt und dabei hilft, Programme der neuronalen Differenzierung, Migration und Reifung zu koordinieren. Scratch1 agiert innerhalb genregulatorischer Netzwerke, die sich mit proneuralen bHLH-Faktoren sowie der transkriptionellen Kontrolle im Zusammenhang mit EMT überschneiden, und prägt während der Entwicklung Zellzustandsübergänge und die Zytoskelettdynamik. Durch die Modulation linienspezifischer Genexpression und die Repression nicht-neuronaler Programme trägt SCRT1 zur Aufrechterhaltung der neuronalen Identität und zur kontextabhängigen Kontrolle der Proliferation bei. Fehlregulierte, mit SCRT1 verknüpfte Transkriptionsprogramme wurden im Zusammenhang mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen sowie in der Krebsbiologie untersucht, wo Entwicklungsregulatoren häufig zweckentfremdet werden, um Differenzierungszustand und Invasivität zu beeinflussen.

Das Scratch1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SCRT1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SCRT1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SCRT1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Scratch1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SCRT1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Scratch1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SCRT1-Exone abzielen, die für die Scratch1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SCRT1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Scratch1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Scratch1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SCRT1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Scratch1 HDR-Plasmid (h) und Scratch1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SCRT1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SCRT1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.