Sclerostin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401527
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Sclerostin O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico Sclerostin, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Sclerostin Anticorpo (C-11): sc-518161
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Sclerostin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401527 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
SOST codifica a esclerostina, uma glicoproteína secretada produzida principalmente por osteócitos que atua como um importante regulador negativo da formação óssea. A esclerostina liga-se aos correceptores LRP5/6 para antagonizar a sinalização canônica Wnt/β-catenina, modulando assim a diferenciação de osteoblastos, a deposição da matriz óssea e a remodelação do esqueleto. Por meio do controle de programas transcricionais conduzidos por Wnt, SOST influencia o acoplamento osteoblasto–osteoclasto e a homeostase mineral. A atividade desregulada de SOST está associada a fenótipos de massa óssea alterada e é frequentemente estudada no contexto da biologia da osteoporose, de displasias esqueléticas e de alterações na remodelação óssea observadas em distúrbios inflamatórios e metabólicos.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Sclerostin (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene SOST em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do SOST, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do SOST na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Sclerostin.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de SOST para a investigação da sinalização de Sclerostin, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) SOST críticos para a função Sclerostin
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos SOST para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo Sclerostin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Sclerostin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus SOST. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo Sclerostin Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Sclerostin (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia SOST para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo SOST definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.