Sarcospan Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421332

Descripción general

Sspn codifica sarcospan, una proteína de membrana tetraspánica que forma parte del complejo distrofina–glicoproteína y ayuda a organizar el sarcolema al estabilizar ensamblajes de receptores de unión a laminina. En el músculo esquelético y cardíaco, sarcospan contribuye a mantener la integridad de la membrana durante la contracción y participa en la mecanotransducción al influir en la distribución y la función de las sarcoglucanas e integrinas asociadas. Se ha relacionado una alteración del ensamblaje del complejo dependiente de sarcospan con la fragilidad muscular y una regeneración deficiente, lo que convierte a Sspn en un punto de partida útil para estudiar vías relevantes para los fenotipos de distrofia muscular. Dado que sarcospan también afecta las interacciones con la matriz extracelular y la organización de microdominios de membrana, se analiza con frecuencia en modelos de daño de fibras musculares, inflamación y remodelación.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Sarcospan (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Sspn en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Sspn junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Sspn tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Sarcospan.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Sspn para la investigación de la señalización de Sarcospan, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Sspn críticos para la función de Sarcospan
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Sspn para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Sarcospan CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Sarcospan CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Sspn. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Sarcospan (m) y el plásmido HDR Sarcospan (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Sspn para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Sspn definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.