Sarcospan CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421332

Übersicht

Sspn kodiert Sarcospan, ein tetraspanes Membranprotein, das Teil des Dystrophin‑Glykoprotein‑Komplexes ist und zur Organisation des Sarkolemms beiträgt, indem es Laminin-bindende Rezeptor-Assemblierungen stabilisiert. In Skelett- und Herzmuskel unterstützt Sarcospan die Membranintegrität während der Kontraktion und trägt zur Mechanotransduktion bei, indem es die Verteilung und Funktion assoziierter Sarcoglykane und Integrine beeinflusst. Eine veränderte, sarcospanabhängige Assemblierung des Komplexes wurde mit erhöhter Muskelanfälligkeit und beeinträchtigter Regeneration in Verbindung gebracht, wodurch Sspn einen sinnvollen Ansatzpunkt für die Untersuchung von Signalwegen darstellt, die für muskuläre Dystrophie-Phänotypen relevant sind. Da Sarcospan außerdem Interaktionen mit der extrazellulären Matrix sowie die Organisation von Membran-Mikrodomänen beeinflusst, wird es häufig in Modellen für Muskelfaserschädigung, Entzündung und Remodeling untersucht.

Das Sarcospan CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Sspn-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Sspn-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Sspn nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Sarcospan-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Sspn-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Sarcospan-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Sspn-Exone abzielen, die für die Sarcospan-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Sspn-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Sarcospan CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Sarcospan CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Sspn-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Sarcospan HDR-Plasmid (m) und Sarcospan HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Sspn-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Sspn-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.