Sarcospan Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-421332-ACT

Il gene murino **Sspn** codifica la **sarcospan**, una piccola proteina di membrana a quattro passaggi (simile alle tetraspanine) che si associa al complesso distrofina–glicoproteine e ai subcomplessi correlati delle sarcoglicane, contribuendo alla stabilità del sarcolemma e a un’efficiente trasmissione della forza nel muscolo striato. La sarcospan partecipa all’organizzazione della membrana, al traffico proteico e a eventi di segnalazione legati all’adesione alla matrice extracellulare e all’accoppiamento con il citoscheletro. Alterazioni della funzione o dell’espressione di **SSPN** vengono studiate nel contesto di vie correlate alle distrofie muscolari, della fragilità delle miofibre e delle risposte di rimodellamento nel muscolo scheletrico e cardiaco. In quanto modulatore dell’assemblaggio dei complessi di membrana, **Sspn** è rilevante per studi su degenerazione muscolare, rigenerazione e meccanotrasduzione in modelli murini.

Sarcospan Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Sspn senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Sarcospan Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Sspn nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Sspn, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Sarcospan. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Sspn nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Sarcospan nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Sarcospan nelle cellule tumorali con espressione di Sspn silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.