SAHH CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402617

概要

AHCYは、メチオニンサイクルにおける主要酵素であるS-アデノシルホモシステイン加水分解酵素（SAHH）をコードしています。SAHHはS-アデノシルホモシステインをアデノシンとホモシステインに加水分解し、S-アデノシルメチオニン（SAM）依存性メチルトランスフェラーゼに対するフィードバック阻害を解除することで、細胞のメチル化能を維持します。この機能を通じて、SAHHはエピジェネティック制御、RNAおよびタンパク質のメチル化、リン脂質生合成に影響し、ワンカーボン代謝をより広範な遺伝子発現プログラムの制御と結び付けています。AHCY活性が攪乱されると、メチル化ポテンシャルや代謝恒常性が変化し、増殖、分化、ストレス応答に関連する経路に影響を及ぼし得ます。SAHH機能の変化は、メチル化に関連する疾患や、がん生物学、免疫学、神経科学の研究モデルに関連する細胞表現型の文脈で検討されてきました。

SAHH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるAHCY遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、AHCY内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、AHCYのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SAHHタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SAHHシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、AHCY欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SAHHの機能に不可欠なAHCYエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、AHCYゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SAHH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSAHH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、AHCY遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SAHH HDRプラスミド（h）および SAHH HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAHCYホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAHCY標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。