Plásmido CRISPR de Activación (h) S-100P: sc-404366-ACT

El gen humano **S100P** codifica **S-100P**, una pequeña proteína de unión al calcio con motivo **EF-hand** que actúa como adaptador de señalización, conectando los flujos de calcio con cambios en la dinámica del citoesqueleto, el control del ciclo celular y programas transcripcionales sensibles al estrés. Se ha descrito que **S-100P** interactúa con receptores y nodos de señalización como **RAGE**, influyendo en vías asociadas a **MAPK** y **NF-κB** que modulan fenotipos de adhesión, migración y supervivencia. La expresión desregulada de **S100P** se ha observado en múltiples neoplasias epiteliales y se estudia con frecuencia como marcador de progresión tumoral y potencial metastásico. Además, la biología de **S-100P** es relevante para la remodelación tisular asociada a la inflamación, donde la señalización dependiente de calcio se cruza con señales de la matriz extracelular y del sistema inmunitario.

S-100P El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de S100P sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

S-100P El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus S100P en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional S100P, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de S-100P. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo S100P y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de S-100P en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía S-100P en células tumorales con expresión de S100P silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.