Plásmido CRISPR de Activación (h) S-100A10: sc-402230-ACT

S100A10 codifica S-100A10 (p11), un miembro de la familia S100 que se une a Ca2+ y que forma un heterotetrámero funcional con anexina A2 en la membrana plasmática y en compartimentos endosomales. Este complejo coordina la activación del plasminógeno y la proteólisis pericelular, influyendo en la remodelación de la matriz extracelular, la adhesión celular y la migración dirigida mediante procesos del citoesqueleto y del tráfico de membranas. S-100A10 también participa en la señalización inflamatoria y en las vías de respuesta al estrés al modular la localización de receptores y las redes de proteasas en la superficie celular. Se ha descrito una expresión desregulada de S100A10 en múltiples contextos patológicos, como la invasión y metástasis asociadas al cáncer, la remodelación vascular y fibrótica, y fenotipos neuroinflamatorios, lo que respalda su utilidad como diana mecanística en investigación centrada en vías.

S-100A10 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de S100A10 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

S-100A10 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus S100A10 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional S100A10, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de S-100A10. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo S100A10 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de S-100A10 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía S-100A10 en células tumorales con expresión de S100A10 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.