RUNX3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419487

Übersicht

Runx3 kodiert den Transkriptionsfaktor RUNX3, ein Runt-Domänen-DNA-bindendes Protein, das mit CBFB zusammenwirkt, um in mehreren Geweben die Festlegung von Zelllinien sowie Differenzierungsprogramme zu regulieren. In murinen Immun- und Epithel-Systemen integriert RUNX3 Signale aus Signalwegen wie TGF-β/SMAD und aus entwicklungsbiologischen Transkriptionsnetzwerken, um Zellschicksalsentscheidungen, Reifung und eine kontextabhängige Wachstumsregulation zu steuern. Eine veränderte Runx3-Aktivität wurde in Modellorganismen mit fehlregulierten Transkriptionsprogrammen in Verbindung gebracht, die für Entzündung, Tumorentstehung und neuroentwicklungsbezogene Phänotypen relevant sind. Als Knotenpunkt der Promotor- und Enhancer-Regulation wird RUNX3 häufig im Hinblick auf seinen Einfluss auf chromatinabhängige Genexpression und die nachgeschaltete Umgestaltung von Signalwegen untersucht.

Das RUNX3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Runx3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Runx3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Runx3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RUNX3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Runx3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RUNX3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Runx3-Exone abzielen, die für die RUNX3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Runx3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom RUNX3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom RUNX3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Runx3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RUNX3 HDR-Plasmid (m) und RUNX3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Runx3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Runx3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.