Plásmido CRISPR de Activación (h) RUNX1: sc-400803-ACT

RUNX1 (AML1) es un factor de transcripción específico de secuencia del complejo core-binding factor que coordina la especificación de las células madre y progenitoras hematopoyéticas, el compromiso de linaje y la maduración de las poblaciones mieloides y linfoides. Regula programas génicos que controlan la proliferación, la diferenciación y la apoptosis mediante la unión a potenciadores y promotores en conjunto con cofactores como CBFβ y remodeladores de cromatina, e interactúa con redes de señalización de citocinas y del desarrollo. Las alteraciones en la dosis o la función de RUNX1 se asocian estrechamente con neoplasias hematológicas y síndromes de fallo medular, incluidas translocaciones recurrentes y mutaciones puntuales que perturban el control transcripcional de la hematopoyesis. Como nodo central en las decisiones de destino de las células sanguíneas, RUNX1 se estudia ampliamente en la regulación transcripcional, la remodelación epigenética y el modelado de vías relevantes para la leucemia.

RUNX1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RUNX1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

RUNX1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RUNX1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RUNX1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de RUNX1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RUNX1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de RUNX1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía RUNX1 en células tumorales con expresión de RUNX1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.