Partículas Lentivirales de Activación (m) RRP8: sc-430400-LAC

Mouse Rrp8 codifica RRP8, una metiltransferasa de ARN nucleolar implicada en la biogénesis ribosomal mediante la maduración y el procesamiento del pre-ARNr y el ensamblaje de subunidades ribosomales funcionales. Al favorecer una modificación precisa del ARNr y la homeostasis nucleolar, RRP8 influye en la capacidad global de traducción, la progresión del ciclo celular y las respuestas celulares a señales de crecimiento y de estrés. La alteración de los factores de biogénesis ribosomal se asocia comúnmente con estrés nucleolar y con una proteostasis alterada, procesos que se estudian con frecuencia en el contexto de defectos del desarrollo y desregulación asociada al cáncer. Por lo tanto, RRP8 constituye un nodo útil para investigar vías que acoplan el procesamiento del ARNr con la proliferación, la estabilidad genómica y los programas transcripcionales.

Las partículas de activación lentiviral RRP8 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Rrp8 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral RRP8 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Rrp8, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de RRP8. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Rrp8 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.