Plásmido Doble Nickase (h) RP105: sc-409643-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)RP105 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa RP105 (h) y el plásmido de doble nickasa RP105 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CD180. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: RP105 Anticuerpo (MHR73): sc-52721
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) RP105 | sc-409643-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) RP105 | sc-409643-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El CD180 humano codifica RP105, un miembro de la familia de receptores tipo Toll que forma un complejo con MD-1 y actúa como componente regulador de la señalización inmunitaria innata en linfocitos B y células presentadoras de antígeno. RP105 modula las respuestas al lipopolisacárido y a otras señales microbianas, modelando la actividad de las vías NF-κB y MAPK aguas abajo, lo que influye en la producción de citocinas, la proliferación y la supervivencia. A través de su papel en el control de los umbrales de señalización asociados a TLR4 y de los estados de activación de los linfocitos B, CD180 es relevante para estudios sobre regulación de la inflamación y disfunción inmunitaria observada en contextos de autoinmunidad, biología de infecciones y neoplasias impulsadas por linfocitos B. La expresión alterada de RP105 y el desequilibrio de su señalización se han asociado con activación inmunitaria aberrante y cambios en las respuestas humorales, lo que lo convierte en un nodo útil para el análisis mecanístico del crosstalk entre la inmunidad innata y adaptativa.
RP105 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CD180 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CD180. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CD180. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CD180 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.