ROR2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-424100

Übersicht

Ror2 kodiert den Rezeptor „receptor tyrosine kinase-like orphan receptor 2“ (ROR2), einen Membranrezeptor, der vor allem als Korezeptor in der nicht-kanonischen WNT-Signalübertragung fungiert, insbesondere als Antwort auf WNT5A. ROR2 reguliert die planare Zellpolarität, die Zytoskelettdynamik und die gerichtete Zellmigration über nachgeschaltete Signalwege, darunter JNK/AP-1 und die Signalübertragung über GTPasen der Rho-Familie. In der Entwicklungsbiologie der Maus beeinflusst die Ror2-Aktivität die Skelettmorphogenese, die Extremitätenmusterung und die Gewebeorganisation und stellt damit einen zentralen Knotenpunkt in Studien zu Differenzierung und morphogenetischer Signalgebung dar. Eine fehlregulierte ROR2-assoziierte Signalübertragung wurde in krankheitsrelevanten Kontexten mit aberranter Zellbeweglichkeit und invasiven Phänotypen in Verbindung gebracht, was ROR2 als mechanistischen Ansatzpunkt für die Untersuchung von Signalwegen und Phänotypen unterstützt.

Das ROR2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ror2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ror2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ror2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ROR2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ror2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ROR2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ror2-Exone abzielen, die für die ROR2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ror2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ROR2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ROR2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ror2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ROR2 HDR-Plasmid (m) und ROR2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ror2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ror2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.