Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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RNF8 Double Nickase Plasmid (h): sc-401909-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das RNF8 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- RNF8 Double-Nickase-Plasmid (h) und RNF8 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf RNF8 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: RNF8: sc-271462
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
RNF8 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401909-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RNF8 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401909-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RNF8 kodiert eine E3-Ubiquitin-Protein-Ligase, die als früher Chromatin-Signalfaktor in der DNA-Schadensantwort fungiert, indem sie an Stellen von Doppelstrangbrüchen die Ubiquitinierung katalysiert und so die Rekrutierung nachgeschalteter Reparaturmediatoren fördert. Durch die Koordination mit ATM-abhängigen Phosphorylierungsereignissen und Ubiquitin-Signalkaskaden hilft RNF8, die Wahl des Reparaturwegs zu organisieren, und unterstützt kontextabhängig sowohl die homologe Rekombination als auch das nicht-homologe End-Joining. Die RNF8-Aktivität trägt zur Aufrechterhaltung der Genomstabilität, zur Regulation von Zellzyklus-Checkpoints und zum Chromatin-Remodeling an geschädigter DNA bei. Störungen der RNF8-abhängigen Ubiquitin-Signalgebung werden häufig in Modellen genomischer Instabilität und krebsassoziierter Defekte der DNA-Reparatur untersucht.
RNF8 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des RNF8-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von RNF8 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die RNF8-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit RNF8-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.