RNF40 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404156

概要

RNF40はRINGフィンガー型のE3ユビキチンリガーゼをコードしており、RNF20と必須のヘテロ二量体を形成してヒストンH2Bをモノユビキチン化（H2BK120ub）します。H2BK120ubは、転写伸長と、H3K4およびH3K79のメチル化とのエピジェネティックなクロストークを結び付ける重要なクロマチン修飾です。この活性を介してRNF40は、RNAポリメラーゼII依存的な遺伝子発現プログラム、クロマチンのアクセス性、ならびに複製ストレス部位や二本鎖切断部位でのクロマチンリモデリングに依存する協調的なDNA損傷応答を制御します。RNF40依存的なH2Bユビキチン化は細胞周期制御や系譜特異的な転写ネットワークにも影響するため、がんやその他の増殖性疾患でみられるゲノム不安定性や転写異常の研究において重要です。さらにRNF40シグナルの変化は、エンハンサーおよびプロモーター機能を文脈依存的に制御することを通じて、炎症や発生関連経路の変動とも関連づけられています。

RNF40 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRNF40遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RNF40内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RNF40のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、RNF40タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、RNF40シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RNF40欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• RNF40の機能に不可欠なRNF40エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RNF40ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• RNF40 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRNF40 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RNF40遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  RNF40 HDRプラスミド（h）および RNF40 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRNF40ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRNF40標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。