RNF150 Plasmide Double Nickase (h): sc-412810-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RNF150 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il RNF150 Double Nickase Plasmid (h) e il RNF150 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira RNF150. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RNF150 Plasmide Double Nickase (h) | sc-412810-NIC | 20 µg | $410.00 |
RNF150 codifica la RING finger protein 150, una presunta ligasi E3 dell’ubiquitina che contribuisce alla regolazione ubiquitina-dipendente della stabilità proteica e della segnalazione. Modulando l’ubiquitinazione dei substrati, RNF150 è in grado di influenzare la proteostasi, il turnover delle proteine regolatorie e l’interazione con vie quali il traffico endosomiale e le cascate di segnalazione attivate dallo stress. Un’alterata attività della via dell’ubiquitina è spesso associata a una disregolazione del controllo del ciclo cellulare, della segnalazione infiammatoria e del mantenimento del genoma, rendendo RNF150 di interesse per studi meccanicistici in questi ambiti. L’espressione e le varianti genomiche di RNF150 sono state analizzate in dataset che coprono molteplici aree patologiche, a supporto della sua utilità come gene candidato per l’annotazione funzionale e la mappatura delle vie di segnalazione nelle cellule umane.
RNF150 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RNF150 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RNF150. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RNF150. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RNF150 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.