Plásmido CRISPR de Activación (h) Ribosomal Protein L22L1: sc-402323-ACT

RPL22L1 codifica la proteína ribosomal L22-like 1, un componente asociado a la subunidad ribosomal grande 60S que favorece la biogénesis de ribosomas y una traducción eficiente del ARNm. Como parte de la maquinaria central de traducción, RPL22L1 contribuye a la proteostasis y a programas relacionados con el crecimiento que acoplan la detección de nutrientes, la progresión del ciclo celular y las respuestas al estrés mediante un control translacional global y selectivo por transcrito. La variación en la dosis de proteínas ribosomales puede influir en el ensamblaje ribosomal y en la traducción especializada, con efectos posteriores en vías vinculadas a la proliferación y la adaptación celular. La expresión desregulada de genes asociados a ribosomas, incluido RPL22L1, se investiga con frecuencia en contextos como el crecimiento oncogénico, alteraciones del metabolismo del ARN y fenotipos tipo ribosomopatía.

Ribosomal Protein L22L1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RPL22L1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Ribosomal Protein L22L1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RPL22L1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RPL22L1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Ribosomal Protein L22L1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RPL22L1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Ribosomal Protein L22L1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Ribosomal Protein L22L1 en células tumorales con expresión de RPL22L1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.