RFX6 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-408496-ACT

RFX6（regulatory factor X6）は、翼状ヘリックス型の転写因子であり、内分泌膵の発生および膵島アイデンティティの維持に必要な遺伝子制御プログラムを統括します。ヒト細胞では、RFX6は系譜特異的なプロモーターやエンハンサーを制御することで、β細胞分化、インスリン分泌機能、さらに広範なグルコース恒常性を司る転写ネットワークに寄与します。RFX6活性の変化は、先天性の膵・腸管内分泌疾患や糖尿病関連表現型と関連づけられており、内分泌細胞の運命決定、ストレス応答、代謝シグナル伝達を研究するうえで重要な結節点となります。核内の制御因子として、RFX6は下流標的や相互作用する転写回路を同定する目的で、発現プロファイリングやクロマチン解析に基づくアッセイで一般的に研究されています。

RFX6 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RFX6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RFX6 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RFX6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRFX6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RFX6の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRFX6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRFX6依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRFX6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRFX6経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。