RFX2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406040

Descripción general

RFX2 (factor regulador X2) es un factor de transcripción de tipo hélice-alada (winged-helix) que se une a motivos X-box y coordina programas de expresión génica necesarios para la ciliogénesis y la función de los cilios móviles. En células humanas, RFX2 regula redes que controlan el acoplamiento del cuerpo basal, el ensamblaje axonemal y el transporte intraflagelar, lo que lo vincula al acoplamiento entre el ciclo celular y los cilios, así como a la diferenciación epitelial. La desregulación de los circuitos transcripcionales de la familia RFX se ha asociado con defectos del desarrollo relacionados con los cilios y con fenotipos reproductivos compatibles con una biogénesis alterada de cilios móviles y flagelos. Como regulador transcripcional situado aguas arriba de múltiples genes ciliares estructurales y de transporte, RFX2 se estudia con frecuencia en vías que gobiernan la depuración mucociliar, el establecimiento de la asimetría izquierda-derecha y la expresión génica relevante para la espermatogénesis.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO RFX2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RFX2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RFX2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RFX2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína RFX2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RFX2 para la investigación de la señalización de RFX2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de RFX2 críticos para la función de RFX2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RFX2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido RFX2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido RFX2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RFX2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR RFX2 (h) y el plásmido HDR RFX2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RFX2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RFX2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.