RFLAT-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404618

Panoramica

KLF13 codifica il fattore di trascrizione RFLAT-1, una proteina a dita di zinco di tipo Krüppel-like che si lega a elementi promotori ricchi in GC per modulare programmi di espressione genica che controllano l’attivazione dei linfociti e la segnalazione infiammatoria. RFLAT-1 è stato associato alla regolazione della trascrizione di chemochine e citochine e può interfacciarsi con vie come le risposte trascrizionali dipendenti da NF-κB, contribuendo a definire la differenziazione delle cellule immunitarie e i loro stati di attivazione. Un’attività disregolata di KLF13/RFLAT-1 è stata studiata in contesti di patologia immunomediata e di firme geniche infiammatorie alterate, nonché in reti trascrizionali che contribuiscono a proliferazione e sopravvivenza aberranti in tipi cellulari rilevanti per la malattia. Queste caratteristiche rendono KLF13 un nodo utile per analizzare la regolazione trascrizionale responsiva agli stimoli e i circuiti genici immunitari in sistemi modello umani.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RFLAT-1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene KLF13 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del KLF13 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto KLF13 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RFLAT-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di KLF13 per lo studio della segnalazione di RFLAT-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni KLF13 critici per la funzione di RFLAT-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di KLF13 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RFLAT-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal RFLAT-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus KLF13. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RFLAT-1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR RFLAT-1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia KLF13 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio KLF13 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.