RelB Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-422643-LAC

Relb codifica RelB, un membro della famiglia NF-κB che agisce principalmente nella via non canonica di NF-κB attraverso la formazione di eterodimeri con p52 (NFKB2). RelB regola programmi trascrizionali che controllano la maturazione delle cellule dendritiche, la sopravvivenza delle cellule B, l’organogenesi dei tessuti linfoidi e la segnalazione infiammatoria indotta da citochine a valle di recettori quali BAFFR, CD40, LTβR e RANK. Nei modelli murini, un’attività alterata di RelB perturba l’omeostasi immunitaria ed è stata associata a infiammazione cronica, autoimmunità e regolazione immunitaria associata ai tumori. Poiché RelB integra segnali di sviluppo e infiammatori, è ampiamente utilizzato per studiare la differenziazione delle cellule immunitarie, il crosstalk tra stroma e sistema immunitario e le reti trascrizionali di NF-κB dipendenti dal contesto.

Le particelle di attivazione lentivirale RelB (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Relb in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale RelB (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Relb, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di RelB. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Relb e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.