REEP2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-432536

Descripción general

Reep2 codifica la proteína 2 potenciadora de la expresión de receptores (REEP2), un miembro de la familia REEP implicada en el modelado de las membranas del retículo endoplásmico y en el soporte de las interacciones entre el RE y los microtúbulos que influyen en el tráfico intracelular. REEP2 contribuye al procesamiento de proteínas de membrana y a la organización del RE asociada a las neuritas, procesos importantes para mantener la morfología neuronal y la proteostasis. La alteración de las funciones de la familia REEP se ha vinculado con la vulnerabilidad axonal y con mecanismos neurodegenerativos, lo que convierte a Reep2 en una diana relevante para estudiar vías que afectan al mantenimiento del axón y a las respuestas al estrés. En sistemas murinos, la perturbación de Reep2 puede utilizarse para analizar la remodelación del RE, la dinámica de orgánulos y la señalización dependiente del tráfico en neuronas y en otros tipos celulares secretores.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO REEP2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Reep2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Reep2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Reep2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína REEP2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Reep2 para la investigación de la señalización de REEP2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Reep2 críticos para la función de REEP2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Reep2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido REEP2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido REEP2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Reep2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR REEP2 (m) y el plásmido HDR REEP2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Reep2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Reep2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.