RecQL5 Double Nickase Plasmid (h): sc-406407-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das RecQL5 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- RecQL5 Double-Nickase-Plasmid (h) und RecQL5 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf RECQL5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: RecQL5: sc-515050
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
RecQL5 Double Nickase Plasmid (h) | sc-406407-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RecQL5 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-406407-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RECQL5 kodiert RecQ-Helikase-Familienmitglied 5, eine DNA-Helikase, die zur Erhaltung der Genomstabilität beiträgt, indem sie die Dynamik der DNA-Replikation reguliert und die Reparatur von DNA-Läsionen koordiniert. RecQL5 interagiert mit der RNA-Polymerase II und trägt zur Kontrolle transkriptionsassoziierter Rekombination bei, wodurch aberrante Crossover-Ereignisse sowie Konflikte zwischen Replikation und Transkription begrenzt werden. Aufgrund seiner Funktionen in der Regulation der homologen Rekombination, der Aufrechterhaltung von Replikationsgabeln und der Antwort auf DNA-Schadenssignale wird RECQL5 häufig in Signalwegen untersucht, die Mutagenese und chromosomale Umlagerungen eindämmen. Eine veränderte RECQL5-Funktion wurde mit Phänotypen erhöhter genomischer Instabilität in Verbindung gebracht, die für mechanistische Forschung zur Krebsanfälligkeit und zu Störungen der Genomerhaltung relevant sind.
RecQL5 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des RECQL5-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von RECQL5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die RECQL5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit RECQL5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.