RecQL5 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-406407-ACT

Das menschliche Gen **RECQL5** kodiert die RecQ-Helikase **RecQL5**, einen Faktor der Genomstabilität, der DNA-Replikation und Transkription reguliert, um abweichende Rekombinationsereignisse zu begrenzen. RecQL5 interagiert mit der RNA-Polymerase II und ist an DNA-Schadensantwortwegen beteiligt, die die Stabilität von Replikationsgabeln fördern, die Auflösung sekundärer DNA-Strukturen unterstützen und genomische Umlagerungen unterdrücken, die mit homologer Rekombination assoziiert sind. Durch die Aufrechterhaltung der Chromosomenintegrität unterstützt RECQL5 einen präzisen Zellzyklusverlauf und wirkt der Anhäufung von Mutationen entgegen, die mit Phänotypen genomischer Instabilität verbunden sind. Eine Fehlregulation der RECQL5-Aktivität wurde mit verstärkter DNA-Schadenssignalgebung und einer veränderten Kontrolle der Rekombination in Zusammenhang gebracht, was RECQL5 für Studien zu Mechanismen der Genominstabilität in Krankheitsmodellen relevant macht.

RecQL5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen RECQL5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

RecQL5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des RECQL5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der RECQL5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen RecQL5-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native RECQL5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von RecQL5-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des RecQL5-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem RECQL5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.