Plasmide CRISPR/Cas9 KO RBMY1J (h): sc-405629

Présentation

RBMY1J code une protéine de liaison à l’ARN liée au chromosome Y, apparentée à la famille RBMY, caractérisée par un motif de reconnaissance de l’ARN et des rôles dans la régulation post-transcriptionnelle. Les protéines RBMY sont principalement exprimées dans la lignée germinale mâle et sont impliquées dans la spermatogenèse via le contrôle de l’épissage des pré-ARNm, de la stabilité des ARNm et, potentiellement, de la régulation de la traduction dans les cellules germinales en développement. Cette activité recoupe des voies de traitement de l’ARN associées au spliceosome ainsi que des programmes plus larges d’expression génique requis pour la progression méiotique et la différenciation des cellules germinales. Des altérations de l’intégrité du locus RBMY ou de son expression ont été associées à des anomalies du chromosome Y et à des phénotypes d’infertilité masculine, faisant de RBMY1J un gène pertinent pour l’étude de la régulation génique dans la lignée germinale et de la biologie de la reproduction.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RBMY1J (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RBMY1J dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RBMY1J, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RBMY1J à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RBMY1J.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RBMY1J pour l'étude de la signalisation de RBMY1J, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RBMY1J essentiels à la fonction de RBMY1J
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RBMY1J pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RBMY1J plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le RBMY1J plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RBMY1J. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RBMY1J plasmide HDR (h) et le RBMY1J (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RBMY1J pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RBMY1J définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.